Автореферат диссертации по медицине на тему Функционально-структурные изменения клеток системы крови при экспериментальном хроническом гелиотринном гепатите и некоторые пути их коррекции

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН

ВТОРОЙ ТАШКЕНТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ

МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ 0д

1 8 окт 1999

На правах рукописи удк: 616.155.392:616.36-002.2-08

ТУХТАЕВ НОДИРБЕК КАДЫРОВИЧ

функционально-структурные изменения клеток системы крови при

экспериментальном хроническом гелиотринном гепатите и некоторые

пути их коррекции

14.00.16-патологическая физиология

автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ТАШКЕНТ - 1999 г.

Работа выполнена в ЦНИЛ Второго Ташкентского государственного медицинского института

Научный руководитель:

Заслуженный деятель науки Республики Узбекистан, доктор медицинских наук, профессор Х.Я. Каримов

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор М.М. Хакбердыев Доктор медицинских наук, профессор С.М. Бахрамов

Ведущее учреждение:

Первый Ташкентский Государственный Медицинский Институт

Защита состоится « » « » 1999 года

в часов на заседании Специализированного Совета

Д.087.09:02 при Втором Ташкентском государственном медицинском институте по адресу: 700109, Ташкент, ул. Фароби, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Второго Ташкентского Государственного медицинского института.

Автореферат разослан « » 1999 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета

доктор медицинских наук, профессор A.A. Батырбеко!

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Заболеваемость вирусными и токсическими вдитами пока еще не имеет тенденции к снижению и остается одной из гуальных проблем современной медицины. Ча фоне загрязнения окружающей :ды, а также нерационального применения лекарственных препаратов, габолизирующихся в печени, вирусные гепатиты, особенно типа В, С и :льта", зачастую приобретают затяжное хроническое течение и нередко ершаются исходом в цирроз печени(А.С Погинов, Ю.Е. Блок, 1987; С.Д.. дымова, 1991, 1993; З.Г Апросина, 1981; В.В. Серов, 1995; Б.Р. Алиев, 1995; С.Абдуллаходжаева, 1998). До данным аутопсий, циррозы печс и встречаются 1 до 11% случаях, составляя в среднем 2 - 3% в мире (Ю.Р. Королько и др., )3; K.P. Batts, J.Ludwig, 1995). Естественно, хреническиеахтпв ые гепатиш, генциально приводящие к циррозу иечеьл, встречаются еще чаще и ттывают в основном лнц молодого и среднего возраста, то есть, наиболее 'доспособную часть населения ( С.Д. Подымова, 1993).

Одним из серьезных осложнений хронических активных гепатитов и эрозов печени является гематологический синдром, более известный в -ературе как синдром "гнперспленизма" или "панцитопении" К.Ерамишанцев и др., 1989; Н.Я.Калита:и др., 1990; B.Dreyfus, 1974). Он (является в виде анемии, тромбоцнтопении и лейкопении в периферической 1ьи и часто сопровождается спленомегалией (З.Г. Апросина. 1981; А.Г. уришвили, Р.Д. Пола-шв, 1988; H . Noguchi et al., 1995; A.Oscar et al , 1996).

За последние годы все чаще стали появляться сообщена о развитии при |>'сных гепатитах глубокой гемоцитопении с гипо- и аплазией костного мозга, бующие неотложной трансплантации костномозговых клеток (J.Van Dam et 1990; S .Toniida et al., 1996).

Патогенез синдрома гипсрспленнзма при хронических гепатитах и циррозах ени до настоящего времени остается невыясненным. Ряд авторов счи : ает, что леченная селезенка является основной при шной депонирования и ышенного разрушения эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов З.Афанасьев и др., 1976; H Я. Калита и др., 1990; Y.S. Markus et al., 1993). На и основаны многие хирургические методы лечения синдрома перспленйзма" при циррозах печени - сплензктомия, эмболизация езеночной артерии, наложение проксимальных и дистальных еноренальных анастомозов и др.(Е.Б. Асламазова, Е.И. Геменска : 1977; .Ахунджанов, И.П. Ким, 1988; V/.W. Coon, 1988; R. Shah et ab 1990; H ;uchi/t al., 1995; A Sanyal et al., 1996 ).

Однако, удаление селезенки или ее выключение из системы портального вотока печени, к сожалению, не всегда дают желаемых»резулыатов. Обычно S3 определенное время после операции у больных вновь развивается анемия, мбоцитопепия и лейкопения.

В настоящее время в патогенезе хронических активных гепатитов и розов печени все большая роль отводится иммунным и аутоиммунным унениям в организме (С.Д. Подымова, 1991. 1996; J. Scholmerich, A.Hostege,' 3, F.Chisary, С. Ferrari, 1995). Это относится и к гематологическим

нарушениям при этих заболеваниях. Еще в 60-70-х годах отечественны! учеными было высказано предположение, что в патогенезе гематологическ: нарушений при хронических активных гепатитах и циррозах печени вален место принадлежит аутоиммунному, конфликту, проявляющемуся в ви нарастания титра аутоантител к эритр цитам, тромб^дитам и лейкоцитам (Г. певин s др., 1969). Аутоиммунный характер гематологических нарушен) убедительно был показан и на экспериментальной модели хроничсско гелиотринного гепатита (Б.П. Глиндеман, 1969; Г.С. Левин, 1972).

Эти данные в последующем получили свое подтверждение многочисленных клинико-иммунологических исследованиях (J Choulot et а 1996; M Katsuhito et al, 1996 ; A. Lachaux et al, 1996). Было доказано, что y okoj 80% больных циррозом печени тромбоцитопения обусловлена наличие противотромбоцитарных антител, лейкопения у них же происходит за сч аутоиммунной гибели лейкоцитарного резерва костного мозга, а анемия у 90 больных с циррозом печени связана с высоким титром антиэритроцитарнь иммуноглобулинов ( M.Mayer et al., 1977; J.Pencira et al., 1995; C. Claise et a 1996; T. Naganine et al., 1996). Вместе .с тем, функциональные и структурнь аспекты реализации аутоиммунных нарушений и их роль в патогене: гематологическ-го синдрома до сих пор остаются нераскрытыми. В< изложенное обуславливает необходимость дальнейших углублениь исследований патогенеза гематологического синдрома при . хроничесю заболеваниях печен.., что. является одной ( из актуальных задач современнс медицины и представляет несомненный научно-практический интерес.

Другим, не менее важным, аспектам этой проблемы, является разрабоп путей коррекции гематологического синдрома при хронических гепатитах циррозах печени. Многочисленными экспериментальными и клиническим исследованиями показано, что биологически активные вещества, полученные i тимуса и других иммунных органов, обладают стимулирующими действиями i гемопоэз и иммуногенез при вторичных иммунодефицитных состояниях (ИДС развивающихся при токсических гепатитах, рентгеновском облученш гемолитических анемиях, тимэктомии, старении и др.(В.Я. Арион, 1989; АЛ А илов и др., 1990; Н.И. Гурарий, 1993; В.В. Базарный, АЛ. Ястребов 199: А.М.Земсков и др., 1994 ; Ф.Ю.Гарьо и др.1995,1996; Р.Х.'Хаитов, Б.В. Пинегю 19S J ; Е iialleari et al., 1992; I.W. Hadden, 1993).Однако, действие иммунотропны преиаратоь на гематологические изменения при хронических гепатитах циррозах печени до настоящего времени недостаточно выяснено. Поэтому поис наиболее оптимальных средств для коррекции гематологического синдрома пр хронических гепатитах и циррозах печени также остается одной из важных зада гематологии и гепатологии.

Цель и задачи исследования.' Целью работы явилось выяснени функционально-структурных изменений клеток периферической крови i костного мозга при хроническом гелиотринном гепатите и разработка путей и: иммунофармакологической коррекции.

...Для достижения цели поставлены следующие задачи:

- исследовать функционально-структурные показатели клеток системы крови в динамике хронического гелиотринного гепатита (ХТТ);

- изучить влияние некоторых иммуномодулирующих препаратов (спленин, такгавив, иммуномодулин) на функции ^льно-структурные параметры клеток крови и костного мозга при хро1 пческом гелиотриниом гепатите.

Цаучная новизна работы. В работе впервые исследованы функционалыю-руктурные особенности клеток системы крови при хроническом гелиотринном патите. Установлено, что в патогенезе анемии, тромбоцитопении и лейкопении и ХГГ важную роль играют: изменение физико-химических свойств нтроцитов и повышение числа их патологических форм; нарушение процесса фференцировки клеток эрнтро- и^ гранулоцитопооза в костном мозге; еличение степени неэффективного эритропоэза в костном мозге; возрастание олиферативной активности клеток лимфо- и моноцитопоэза при неизмененном овне пролиферации клеюк эрщро- и гранулоцитопоэза; увеличение частоты являемости деструкции клеток всех ростков гемолоэза и усиление их стномозгового фагоцитоза.

Проведенный сравнительный анализ эффективности использованных :мунотропных препаратов из функционально-структурные показатели системы ови экспериментальных животных при хроническом гелиотринном гепатите ад ал; иммуномодулин и тактивин оказывают стимулирующее влияние на эти казатели, тогда как спленин практически не влияет на них.

Практическая ценность. Полученные-данные позволяют более углубленно осмотреть патогенез гематологических нарушений ; при хронических 5олеваниях печени и являются экспериментальным обоснованием к их рмакологической коррекции иммуиотропными лекарственными препаратами, лученными из тимуса. Они также могут быть использованы для оптимизации гбного процесса при преподавании курсов патологической физиологии и утренних болезней в медицинских институтах.

Апробации. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на: :ж«/народном симпозиуме "Проблемы саиогешюго и патогенного эффектов шэкологических воздействий на внутреннюю среду организма" (Чолпон-Ота, 33); IV съезде терапевтов Республики Узбекистан (Ташкент, 1995); XIII нталия, Турция 1996) и XIV Национальном Конгрессах (Мерсин, 1997) ггроэнтеролшов Турции; Международном Симпозиуме по гепато-билиарно-икрсатическим наукам (Измир, Турция, 1997); научно-практических пференциях ученых Второго Таш Гос МИ (Ташкент, 1996, 199,).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 3 пъи в научных журналах.

Объем и стпуктупп работ. Диссертация изложена на 137 страницах шинописного текста, иллюстрирована 24 микрофотографиями и 24 таблицами, стоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, ультатов Собственных исследований, обсуждения и выводов. Список гературы включает 241 источник.

Основные положения, выноснмые на защиту:

1. Хронически» г«,лиотринный гепатит приводит к развита гематологического синдрома в виде анемии, тромбоцитопении лейкопении в периферической крови, которые обусловлены нарушение процессов гемопоэза и усилением деструкции клеток системы крови.

2. Наиболее высоким положительным эффектом при хроническо г^лиотринном гепатите обладаюг иммуномод>.,ин и тактивин, тогда кг действие спленина на гематологические показатели выражен незначительно и носит незакономерный характер.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использованы белые лабораторные крысы-самцы с исходно массой тела 130-150 г. Животные ,•> начала эксперимента находились в течени нежели в карантине, и далее, после исключения соматических или йнфекционны заболеваний переводились в обычный режим вивария. Модель хроническог -оксичеокого гепатита воспроизводили еженедельным введением алкалоид гелиотрина в течении 6 недель в дозе 5 мг/100 г массы тела по схем (Н.Х.Абдуллэев, Х.Я.Каримов, 1989). В результате многократных инъекци: гелиотрина на 60 - сутки опытов развился хронический гепатит, которые несмотря на прекращение поступления гелиотрина прогрессировал и к 90-суткш в большинстве случаев трансформировался в цирроз печени, что был> подтверждено морфологическими исследованиями ткани печени.

Функциональные и структурные показатели системы крови у животных -хроническим гепатитом были изучены на 40-е, 60-е и 90-е сутки опытов, считк от качала введения гелиотрина. Контрольной группой для этих серий ощ>гго; служили крысы с аналогичной массой тела, получившие вместо гслиотрин; стерильный фи: ологический раствор (контрольная группа без гепатита).

В других сериях опытов с целью коррекции гематологических показателей начиная с 60-х суток эксперимента в течение 10 дней ежедневно вводил] подкожно тактивин (1, 4мкг/кг), или спленнн (0,1 мл/кг) или иммуномодуяин (! мк-'кг) Для этих серий контролем служили животные с хроническим гепатитом получившие вместо указанных препаратов стерильный физиологический р"отво] того же объема (контрольная групгл с гепатитом без коррекции), Исследованш поктзате гй крови и костного мозга в этих сериях проводились на следующи! день пос; г окончания коррекции. таким образом, все животные бьш распределены на следующие группы:

Ьхрашиеский гепатит на 40 - ,9угки;

Н-хр нический гепатит на 60- сутки;

III-хронический гепатит на 90- сутки;

IV-коитрольная группа без гепатита;

V-коррекция тактивином;

VI-коррекция спленином;

УИ-коррекция иммуномодулином;

УШ-конгулькая группа с гепатитом без коррекции.

;его было использовано 127 крыс. Из них 15 погибли по ходу экспериментов я 1ли исключены из работы. Таким образом, общее количество «латных, пользованных в работе, составляло 112 крыс.

Забой" как 'контрольных, так и опытных животных проводили в ответствующие сроки, в утренние часы натощак, под легким эфирным ркозом.

Общее количество эритроцитов, лейкоцитов подсчитывали с помощью парата <<В1оос1еошП». Содержание (емоглобина определяли на гемометре Сали , I принятому методу. Для определения количества ретикулоцитов испопьзовали ггод суправитальной окраски, а число тромбоцитов подсчитыгмш на мазках ови по общепринятой методике. Подсчет лейкоцитарной формулы и 1елограммы производился на мазках крови и костного мозга, 01: ашенных по шпенгейму. Физико-химические свойства эритроцитов оценивали по екгрическому пробою (А.В.Путвинский и др., 1983), электрофоретической движности и «дзетта» потенциалу(Н.Л.Новиченко, А.И. Горовои, 1981). :мотическая резистентность эритроцитов определяли' по общепринятой тодике.

С целью изучения кинетики и пролиферативной активности клеток мопоэза был использован метод радиоавтографии ин виво. В соответствующие оки за 1 час до забоя как контрольным, так и опытным животным утрибрюшинно вводили 3Н - тимндин из расчета 4 МБк на 100г массы. Через с после инъекции животные забивались цекапитанией под легким эфирным ркозом. Мазки костного мозга, полученные из бедренной кс ти, фиксировали таловым спиртом и покричали жидкой фотоэмульсией типа «М». После позиции в темноте в течеь..и 3-х недель мазки проявляли в амидоловом оявители и окрашивали азур-эозином по Романовскому. Подсчитывали личссгво меченых ядер на 1000 миелокариоцитов, результаты выражали в оцентах и обозначили как индекс меченых ядер (ИМЯ).

"пя оценки степени неэффективного эритроп^эза использовали ШИК-1кцшо (Г.И.Козинец и др., 197&). При этом подсчитывали количество ШИК -ложктельных эритроидных клеток и выражали в процентах.

Морфологическое состояние к :еток гемопоэза оценивали с помощью шсмиссионной и сканирующей электронной микроскопии (ТЭМ и СЭМ). Для шсмиссионной электронной микроскопии кровь и костный мозг фиксировали , 25% растворе глутар-альдегида, а затем в 1 % растворе четычехокиа осмия. 1сле обезвоживания, материал заливали и смесь аралдита »1 эпона. нтрастированные уранил-ацетатом и цитратом свинца ульратонкие спезы осматривали в электронном микроскопе .ШМ-7. Для сканирующей гктрошюн микроскопии фиксированные и обезвоженные клетки следовательно напыляли углеродом, золотом и исследовали в сканирующей иставке к микроскопу .ШМ-ЮОБ. При этом главным образом обращено имание на состояние эритроцитов и подсчитано количественное соотношение личных их форм(К.Р.Тухгаев и др., 1988)

Все цифровые данны обрабатывались методом вариационной статистики н компьютере IBM PC/AT, достоверными считались различия, удовлетворявши Р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Наши данные показали, что .елиотршшый • гепатит сопровождаете существенными изменениями в системе, крови, которые наиболее част проявляю ся в виде анемии, лейкопении и тромбоцитчпении. Эти изменени носили выраженный характер на 60-е сутки хронического гепати i j, ;"огда у окол 90% животных развивалась анемия средней и тяжелой степени. Несмотря н прекращение инъекций гелио грина, на 90-е сутки опытов явления гемоцитопени] усугублялись, то есть, анемия, лейкопения и тромбоцитопения приобрели ещ более выраженный характер.

Нами установлено, что хронический гслиотринный гепатит" еще в ранни сроки приводит к нарушению дифференцировки клеток кроветворения в костнои мозге. Так, на 40-е сугки опытов в костном мозге имело место увеличение числ эритроидных клеток, главным образом, за счет базофильных нормоцитов, тогд как количество гемоглобинизированных оксифилышх нормоцитов снижалось Эти сдвиги приобрели еще более выраженный характер на 60-е и 90-е сутю экспериментов свидетельсгвовали о нарушении процессов созревания клето! системы эритрон. Следует указать, что гиперплазия эритроидного ростка i преобладанием негемоглобинизированных форм эригроидных клеток являете: характерным признаком нарушений эрнтрэпоэза при многих видах анемш (Г.И.Козинец, Е.Д.Гольдберг, 1982).

Аналс ичные нарушения процессов дифференцировки обнаружены также i при изучении нейтрофильного ростка костного мозга. На 60-е сутки опыто> установлено сн «ение общего числа клеток нейтрофилопоэза до 39 ± 1, 0% npi контроле 52 ± 0, 8%, Р < 0, 05. При этом достоверно уменьшалось числс сегментоядерных и палочкоядерных форм нейтрофилов, тогда как относительно! содержание промиелоцитов, миелоцитов и метамиелоцитов оставалос1 по-ышенным. Указанное свидетельствовало о нарушении tipoueccoi дифференцировки клеюк нейтрофильного ряда и на значительное енк тенж костномозгового пула нейтрофилов три хроническом гепатите, что согласуется < мн'чие^ ряда исследователей (G.Gambiaghi, S.Painna, 1978). Характерно, чте процесс д фференЦировки других клет^к гранулоцитопоэза (эозинофильных v базофильных гранулоцигов) практически не изменялся, хотя наблюдалаа некогорая тенденция к увеличении?, числа эозинофильных гранулоцитов.

Нарушение процессов дифференцировки клеток эритрона i нейтрофилопоэза сопровождалось выраженной активацией клеток системы монопуклеарных фагоцитов. В разгаре хронического гелиотринного гепатите чи^ло моноцитов и макрофагов увеличивалось почти в 3 раза по сравнению с контролем (Р < 0, 05). Известно, что макрофаги, помимо участия в качеств« вспомогательных клеток в иммунных реакциях, выполняют также и poni •"санитаров", tr ищая организм от деструктивных клеток (Р.В.Петров, 1982; К.А, Зуфаров, K.P. Тухтаев, 1987). В данном случае, вероятно, увеличение числа

акрофагов связано прежде всего с повышением степени деструкции роветворных клеток. Не исключена возможность, что, выделяя ингиии^ющие эитропоэз факторы (Н,Ю. Громыхина, В.А. Козлов, 1997), макрофаги еще эльше усугубляют нарушения в системе эритрпна.

И, наконец, одним из ярких проявлений влияния хронического глиотринного гепатита на костный мозг была плазмацитарная реакция в эстном мозге. Количество плазматических клеток на 60-е сутки опытов более 9 зз превышало показатели контроля (Р ^ 0, 001). Наряду со зрелыми пазматическими клетками при этом часто обнаруживались плазмабласты, роплазмациты, находящиеся на различных стадиях мнтотиче coro деления, л алогичная плазмацитарная реакция описана рядом авторов в костном мозге эльнпх циррозом печени (П.М.Альперин и др., 1970; К.А. "ufarov, K.R. ukhtaev, 1980), однако, этот факт не получил должного объяснения.

Известно, что плазматические клегки являются производными В -1мфоцитов и главными продуцентами антител (Р.В. Петров, 1982). Образование тона плазматических клеток против того или иного антигена происходит при <астии Г .- хелперов, макрофагов и других вспомогательных клеток ммуногенеза ( К А.Зуфаров, K.P. Тухтаев, 1987), тогда как сам процесс ролиферации и дифференциации плазматических клеток регулируется Т -/прессорами (Р.М.Хаитов и др., 1995). Увеличение числа плазматических 1еток при гелиотринном гепатите может быть объясненц интенсификацией роцессов антителогенеза и нарушением контроля над пролиферацией и г)фференцировкой клеток В - системы иммунитета. Подтвер ждением даг юго эедположения являются многочисленные литературные данные, !идетельствующие о снижении числа популяций Т - супрессоров и о эвышении содержания иммуноглобулинов при хронических активных патитах и циррозах печени (Ш.Я. Закирходжаев, 1992, С Д. Подымова, Н.Б. зчвелишвили, 1996; G.T. Alexander, 1990). Таким образом, хронический mihi ринный гепатит сопровождался выраженными нарушениями процессов 1фференцировки клеток эрнтрона и нейтрофилопоэза, то1да как число и ункцнонапьная активность клеток моноцито-макрофагального и тазмацитарного рядов существенна^ повышалась. В этой связи представлял 1ределенный интерес изучение пролиферативной активности клеток моцитопоэза радиоавтографическим способом с помощью 3Ц - тимидина. ами обнаружено, что. хронический гелиотринный гепг ит не оказал 'щественного влияния на пролиферзтивную активность клеток эритрЪидного и миулоцитарного ростков. Отмечено лишь умеренное, но недостоверное эвышение пролиферации клеток эритрона, а показатели пролиферации клеток >анулоцитопоэза оставались без изменений. Эти данные несколько отличаются г результатов других авторов, обнаруживших снижение пролиферации клеток жтронэ у бстьных циррозом печени (Ю Р. Корольке и др., 1993), что может >1ть связано с различием использованных методических приемов. Иные данные ши получены при изучении пролиферативной актилности клеток, оноцитарного и лимфошпарного ростков кроветворения. Установлено, что золиферагивная активность клеток моноцнтарного ростка на 60-е и 90-е сутки

экспериментов досювер1. j увеличивается. Такое же достоверное увеличен» нролиферативной активности было обнаружено в клетках лимфоцитарног ростка костного мозга. Эти факты могут быть объяснены с позици вышеприведенных данных миелограммы, в которых отмечалось напичи выраженных моноцитарно-макрофагальных и плазмацитарных реакций костном мозге в эта же сроки хронического гелиотрклного гепатита. Очевидно что усиление пролиферативной активности этих клеток является одним и звеньев патогенеза иммунных нарушений, наблюдающихся при хронически заболеваниях печени (И.Н.Алексеева и др.; 1991; И.Ю. Касымов и др . 1992; О.К Яхонтова, О.П. Дуданова, 1992 ; F . Chisary, С. Ferrari, 1995).

Доказано, что острые и хронические поражения печени, особенн гелиотринной этиологии, приводят к увеличению числа свободных радикалов i усилению степени перекисного жисления липидов, что в свою очеред обусловливает дестабилизацию мембранных структур клеток ( Х.Я. Каримов i др., 1996). Кроме того, у больных с хроническими заболеваниями печеш обнаружены выраженные нарушения метаболизма эритроцитов ( J.Smith et al. 1979).

Проведенные нами исследования физико-химических свойств эритроцито] при хроническом гелиотринном гепатите в значительной мере подтвердили эп данные. Нами показано, что электрофоретическая подвижность эрйтроцитов npi хроническом гепатите снижается на 18-29% по сравнению с контролем Одйовременно снижались их осмотическая резистентность и nopoi электрического проббя мембран. Такие эритроциты легко разрушаются i фагоцитируются макрофагами костного мозга или селезенки (M.Bessis, 1973 K.Goebel et al., 1977; K.A.Zufarov, K.R.Tuklitaev, 1979). Эти данные получил! свое подтверждение при изучении эрйтроцитов с. помощью растровой электронной мг -роскопии. выявлено, что на 60-е и 90-е сутки эксперименте! число патологически измененных форм эритроцитов (деформированны> эритроцитов, эритроцитов в виде "тутовой ягоды " и других) значительно увеличивалось. При этом существенно уменьшилось относительное количестве нормальных эритроцитов (дискоцитов), обладающих более высоко? резистентностью и ригидностью (К.Р.. TyxfaeB и др., 1988). Таким образом хронический гелиотринный гепат-т оказал дестабилизирующее влияние ш мембран: ые структуры клеток, прежде всего, на мембраны эритроцитов. Отсюда следует, то измененные в качественном отношении эритроциты легко распознаются макрофагами костного мозга и фагоцитируются ими, что в конечном more приводит к усилению степени внутрикостномозговой деструкции и эритроС Лгодатоза (Х.Я. Каримов, Н.К. Тухтаев, 1995 ; N.K. Tukhtaev, Kh.Ya. Kaiimov, 1997). Усиление внутрнкостномозгового фагоцитоза клеток эритрона оценивается как "неэффективный эритропоэз" и определяется по довольно простой методике выявления ШИК-положительных эритроидных клеток костного Мозга (Г.И. Козпнец, И.А. Быкова, ] 980).

Использование данного метода позволило нам получить данные, которые •»подтвердили дополнили наши результаты исследований (Ьизико-химических свойств эритроцшов. Нами обнаружено, что при хроническом гелиотринном

татите число ШИК-положительных эритроидных клеток, иначе говоря, гибаюших клеток, увеличивалось более чем в 3 раза но сравнению с нтролем. Эти данные, свидетельствующие об увеличении степени эффективного эритропоэза в костном ; озге, являются одним из доказательств стабилизации мембранных структур при хроническом гелиотринном гепатите, представляет собой одно из 'важных звеньев в патогенезе анемии при этой гологии(Н.К.Тухтаев, М.Д. Маннанова, 1998). Об усилении степени аффективного эритропоэза - как важного звена в патогенезе анемии у больных ррозом печени, сообщают и другие авторы (Ю.Р.Королько и др., 1993).

Основополагающие сведения о повреждении мембранных структур клеток лопоэза при хроническом гелиотринном гепатите нами получены с помощью стройной микроскопии; Обнаружено, что уже на 40-е сугки оньиов в ряде «рондных клеток опр.- шляется вакуолизация цитоплазмы и лизис ядра. В фференцирующихся гранулоцитах имеет место нарушение процессов щулогенеза, деструкция компонентов комплекса Гольджи и зернистой югшазмати ческой сети. В большинстве мсгакариоцчтов наблюдается еньшение числа гранул и снижение формирования демаркационных мембран; ), по -мнению некоторых авторов, указывает на торможек./е процесса шбоцйтообразовэния (Z.Rolovic, M.Baldini, 1970).

Деструктивные изменения клеток гемопоэза продолжали прогрессировать юстигали своего максимума на 60-е и 90-е сутки экспериментов. В эти сроки состном--мозге очень часто выявлялись крупные макрофаги, содержащие в •ей цитоплазме фагоцитированные фрагменты кроветворных "клеток на личных стадиях лизиса. Наряду с этим на ультратоикнх срезах чдето труживаЛись "плазматические островки", состоящие из 4-5 и более ^магических клеток. Большинство из них отличались наличием гертрофированного комплекса Гольджи и многочисленных клазмацитозных именгов по периферии клеток, что указывало на интенсивный процесс ителогенеза и напряженность иммуноцитопоэза в костном мозге.

Таким образом, полученные нами данные показали, что в основе развития [агологического синдрома при хроническом гелиотринном гепатите лежат, аде всего, нарушения процессов дифференцировки клеток гемопозза, шение их внутрикостномозговой деструкции, обусловленное дестабилизацией бранных структур. Возникает вопрос, - чго же является пусковым :анизмом этих h .енений? Можно было бы допустить, что они вызваны осредственным токсическим действием самого гелиотрина. Однако, :атологимеские изменения прогрессировали и достигали своего максимума на е и 90-е сутки опытов, то есть, спустя через 25-55 дней после прекращения >екций гелиотрина. Дело в том, что гелиотринная модель хронического атита отличается от других моделей постепенным прогрессироианисм атита и переходом его в цирроз печени, чем она напоминает хронические ивные вирусные гепатиты типа В или С (Н.Х.АбдуллаеБ. Х.Я. Кчримов» 9). Приоритет .о изучен, га этиологи'' эпидемиологии, патогенеза, оморфологии и других аспектов острого и хронического поражения печени иотрпном, безусловно, принадлежит ученым " нашем республики

(Н.Х.Абдуллаев, 1978; М.С. Абдудлаходжаева, 1998). Благодаря эп исследованиям были раскрыты многие стороны патогенеза токсическо гепатита и разработана экспериментальная модель острого и хроническо гелиотрииного гепатита.

Исследованиями профессора Г.С. Левина и сотрудников показано, ч анемия и лейкопения у крыс с гелиотринн'ым гепатитом в большинстве случа обусловлены аутоиммунными нарушениями в организме ( Г.С. Левин и д 1969). Ими установлено, что при этой патологии в крови неоднократ повышается титр антител прочив эритроцитов, лейкоцитов, а также прот гепатоцитов. Все это в конечном итоге обусловливает панцитопению в крови развитие аутоагрессивного гепатита у большинства жыютных ( Г.С. Лев} 1972).За последние годы в литературе появились сведения с ведущей ро иммунной системы в патогенезе ост ых и хронических заболеваний печени гематологических нарушений, часто сопровождающих их (F.Chisary, C.Ferra 199^, М.Как 'hito et al., 1996). Было выявлено, что анемия, лейкипения тромбоцитопения при острых и хронических заболеваниях печени неред обусловлены появлением антител против клеток того или иного рост кроветворения в результате иммунных нарушений в организме (J. Pawlotsky et г 1995; A. Oscar et al., 1996). На существенную роль иммунных нарушений патогенезе хронического гелиотрииного гепатита указывают многочислен!!! данные сотрудников нашего института (Е.Х. Азизов, 1996; К.Р. Тухтаев и Д 1996; МХ.Рахметова, 1998). В этих работах показано, что экспериментальщ хронический гелиотринный гепатит сопровождается дисбалансом между Т - И - системами иммунитета, нарушением пролиферации и дифференцировки клет тимуса, гнпоДлазией Т - зависимых и. гиперплазией В - зависимых з периферических иммунных органов. i

В свете анализа собственных и литературных данных патоген гем; ологических изменений при хроническом 1елиотринном гепатите мож представить следующим образом: гелиотрин, вызывая нарушен гемомикроциркуляции в печени и повреждение гепатоцитов, способству развитию токсического воспаления в цечени. В хранивши* патологическс процесса печени важную роль играет дисфункция тимуса и костного моз приводящая к дисбалансу между Т - и 8 - системами иммунитета, что, в св< очередь, обусловливает развитие аутоиммунных нарушений в организме появлением ангцтел против клеток крови и печени. Аутоантнтела еще болы усугубляют течение воспалительного процесса в печени с гибелью больш части гепатоцитов и развитием цирроза. Одновременно аутоантите способствуют усилению степени деструкции клеток крови и костного мрз: нарушению процессов пролиферации и дифференцировки клеток кроветворен) что в конечном итоге проявляется в 'виде анемии, тромбоцнтопении лейкопении в периферической крови. Естественно, в развитии гематологическс синдрома немаловажную роль играют и метаболические нарушения в организи возникающие в результате недостаточности печеночных функций.

За последние годы появились клинические и экспериментальные данные благоприятном влияние иммуномодулирующих препаратов na i ечеи

энических гепатитов и циррозов печени(Ш Я.Закирходжаев, 1992; АТашпулатов, 1991 ; P.A. Нурмухамедова, 1992). Однако, их влияние на отологические показатели при хроническом гелиотринном гепатите гавалось невыясненным (N.K. Tukhtaev. 1997).

На основании полученных экспериментальных данных нами была гдпринята попытка коррекции гематологического синдрома при хроническом шотринном гепатите. Для этой цели были использованы спленин, тактивин и муномодулин, которые вводились ежедневно в терапевтических дозах в [ение 10 дней. Выбор данных препаратов был произведен на основе огочисленных литературных данных, в которых доказаны мбраностабилизирующие, иммуномодулирующие, гемо - и муностимулирующие действия этих веществ(В.Я. Арион, 1989; 1Ширинский, Е.А.Жук 1991; A.M. Земсков и др., 1994; Ф.Ю. 1ариб и др., >5,1996).

Из апробированных нами препаратов спленин фактически не оказал цественного влияния на показатели гемограммы. После коррекции этим паратом анемия, лейкопения и тромбоцитопения практически сохранялись на « же уровне, который был обнаружен до коррекции. Незначительное ышение числа лейкоцитов после коррекции спленином оказалось тистически не достоверным. Аналогичным образом спленин существенно не иш на процессы нарушенного костномозгового кроветворения при шическом гелиотринном гепатите. В костном мозге после коррекции енином нарушения процесса дифференцировки клеток системы' эритрона, 1Ышеиие числа клеток моноцитарно-макрофагального ростка и плазмацитов ранялись. Спленин не оказал определенного влияния на физико-химические' Йства эритроцитов и не снижал высокий уровень неэффективного эритропоэза остном мозге. Небольшое уменьшение пролиферативчой активности клеток ю - и лимфоцитарного ростков гемопоэза под действием спленина оказалось гистически не достоверным. Известно, что спленин является биологически явным веществом, выделенным из селезенки. Его мембраностабилизирующне епатопротекторные свойства можно считать доказанными (В.В. Корпачев,

Онйщенко, 1989). Однако, иммуномодулирующие и гемоотимулируюшие ствия данного препарата оказались невысокими. Это подтверждают и данные >фологических исследований лимфатических узлов и тимуса при хроническом иотринном гепап /е, когда коррекция спленином практически не оказала (ественного влияния на нарушенную структуру этих анов(М.Абдурахманов, K.P. Тухтаев, 1996; М.Х. Шахматова, 1998).

Наши данные показали, что наиболее выраженным положительным ствием для коррекции гематологических изменений при хроническое иотринном гепатите обладают препараты, полученные из тимуса животных, огочисленными клиническими и экспериментальными исследованиями азано, что тактивин (Т - активин) способствует стимуляции процессов лиферации, миграции и дифференцировки Т - лимфоцитов (В.Я. Арион, 7;Э.Н. Шляхов, В.В. Гылко, 1989). Клинические f. испытания показали окую иммуномодулирующую способность тактивина при многих вторичных

иммунодефицитных состояниях (К.Б.Курмзнова, 1991; Д.Б.Белокровский и др 1992). Наши данные также подтвердили эти результаты. Нами выявлено, что пс влиянием тактивина существенно повышается число эритроцитов, тромбоцитов лейкоцитов, возрастает содержание гемоглобина, хотя они и не достигал контрольного уровня. Тактивин способствует значительному восстановлени физико-химических свойств эритроцитов',' существенному снижению степев неэффективного эритропоэза и повышению пролиферативной активности клетс эритро - и гранулоцитарного ростков костного мозга. Вместе с тем степе! деструктивных изменений клеток кроветворения остается все еще достаточ* высокой.

Однако поиск и разработка новых иммуномодулир) ющих лекарственнь препаратов продолжается. Результатом многолетних эксг :риыентапьнь: исследований профессора Ф Ю. ГариРт и его учеников (ФЮ. Гариб и др., 199; 1996; Ф.Х. Расулов, 1995) стало создание нового отечественно! имм\. .юмодупора - иммуномодулина, который уже разрешен для клинически применения. Показано, что иммуномодулин стимулирует пролиферацию дифференцировку стволовых кроветворных клеток, усиливает гемопоэз красном костном мозге, устраняет дисбаланс между Т - и В - системами пр вторичных иммунодефицитиых состояниях, возникающих в результа! токсического гепатита, действия ионизирующей радиации и гемотоксически ядов (А.Турдиев, 1997). Данный препарат был нами апробирован для коррекци гематологического синдрома, развившегося при экспериментально хроническом гелиотринном гепатите. Выявлена, что иммуномодулин приводит существенному повышению числа эритроцитов, лейкоцитов и тромбоците почти до нижних границ нормы. Особенно следует отметить достоверно повышение числа лимфоцитов по сравнению с группой животных с хронически гелиотринным гепатитом, не получивших, коррекцию и..1муномодулиао( Имм ном одул ин в значительной степени способствовал восстановлени: нарушенного костномозгового кроветворения при хроническом гелиотринно гепатите: повышался индекс созревания эритроидных клеток за счет увеличен* числа полихроматофильных и оксифильцых нормоцитов; общее количестс нейтрофильных лейкоцитов увеличивалось за счет сегментоядерных палочкоядерных их форм; значительно снизился уровень плаЗмацитарной макрофагальной реакции костного мозга. Под действием иммуномодулиь восстанавливались физико-химические свойства эритроцитов: повышались и осмотическая резистентность и электрофоретическая подвижность; значителен уменьшалось число пагопогических форм эритроцитов по данным растрово электронной микроскопии. Данный препарат, наряду со снижением уров! неэффективного эритропоэза в костном мозге, приводил к достоверном повышению пролиферативной активности эритроидных клеток и снижен» пролиферации клеток лимфо - и моноцитарного ростков. И, наконе! иммуномодулин способствовал существенному снижению частоты выявляемое! деструктивных изменений субклеточных органелл клеток гемопоэза.

Таким образом, сравнительный анализ показал достаточно высокую фективность тимических пешидов для коррекции гематологического чдрома при хроническом гелиотринном гепатше.

Хронический гелиотринный гепатит приводит к развитию гематологического синдрома, который проявляется в виде анемии, тромбоцитопении и лейкопении в периферической крови и изменениями функционально-структурных параметров клеток системы крови. Анемия, носящая умеренно гипохромный характер, сопровождается: снижением электрофоретической , подвижности, осмотической резистентности и уве щчением числа патологических форм эритроцитов; нарушением процесса дифференцировки эритроидных клеток костного мозга, усилением их внутри костномозговой деструкции и повышением степени неэффективного эритроноэза. Эти изменения на фоне умеренной пролиферлтивнон активности клеток оригрона играют несомненную роль в патогенезе наблюдаемой анемии.

Нарушение процессов дифференцировки клеток гранулоцито - и тромбоцитопоэза, повышение степени их деструкции в костном мозге являются отдельными патогенетическими механизмами лейкопении и тромбоцитопении, развивающихся при хроническом гелиотринном гепатите.

Хронический гелиотринный гепатит сопровождается выраженным увеличением числа, повышением пролиферативной и функциональной активностей клеток макрофагального и плазмацитарного рядов костного мозга. Эти изменения, свидетельствующие о напряженности процессов иммуногенеза, подтверждают важную роль иммунных нарушений з патогенезе гематологического синдрома при хроническом гелиотринном гепатите.

Использованные иммунотропные препараты оказали неодинаковое влияние на показатели крови и костного мозга в условиях хронического гелиотринного гепатита:

иммуномодулин и тактивнн способствуют восстановлению показателей гемограммы и миелограммы, снижению частоты деструктивных изменений и активации про^.лферативных процессов в кроветворных клетках; пленил не оказывает существенного влияния на функционально-структурные показатели клеток системы крови при хроническом гелиотринном гепатите, выявленные положительные свойства ичмуномодулина и тактивина дшот основание рекомендовать их к использованию в комплекс з патогенетической терапии гематологического синдрома при хронических поражениях печени.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. К.Р.Тухтаев, М.Х.Рахматова, Н.К.Тухтаев. Ультраструктурные особенност сосудов микроциркуляюрног о русла тимуса и красного костного мозга пр хроническом токсическом гепатите ,// В кн, «Проблемы саногенного патогенного эффектов экологических воздействий на внутреннюю сред организма». Материалы Междун.симпозиума. -Чолпон-Ата, 1993. - C.22i 230.

2. М.Е.Ильхамов, Н.К.Тухтаев. Структурно-функциональные особенност реакции красного костного мозга при экспериментальном хроническо: гепатите// Морфология.-1993, №9-10. -С.86.

3. Н.К.Тухтаев, А.К.Зуфаров, Х.Я.Каримов. Структурные аспект: панцитолений при хронических заболеваниях печени и пути их коррекции Первый съезд морфологов Узбекистана. Тезисы докладов.- Ташкент, 1993 О.306-307.

4. . X,Я.Каримов, Н.К.Тухтаев. Структурно-функциональные аспекты реакци

клеток системы крови при хроническом гепатите и некоторые пути е коррекции // Профилактика и лечение иммуцодефицитных состояний. Ташкент, 1995. -С.36-38.

5. НК.Тухтаев. Влияние комплексной иммуномодудирующей терапии н состояние клеток системы крови при хроническом токсическом гепатите ; Актуальные вопросы медицины. -Ташкент, 1996. -С.33-34.

6. N.K.Tukhtaev The pathogenesis of anemia at the chronic liver disease //Turkish . Gastroenterol. - 1997. - Vol.8, N 1. -P.103

7: 1 N.K.Tukhtaev, F.Azizova, B.Khatamov Structural changes of the blood systei: cells at the chronic experimental hepatitis and their correction //Turkish J Gastroenterol. - 1996. - Vol.7, N 1. - P.87.

8. N.K.Tukhtaev, Kh.Ya.Karimov The cellular mtchanizms of the pancytopenia г tne experimental liver pathology //Turkish J.Surgery. 1997, - Vol. 13, N 6. - P. 134

9. Тухтаев H.K., Манноноза М.Д. Тажрибавий сурункали гепатитда ко системасида руй берадиган узгарщилар ва уларни тиклашнинг баъз] йуллари //Патология. - 998. - N 2. - Б.38-41.

10. Н.К.Тухтаев, А.Н.Отажанова, М.Ф.Маматназарова. Сурункали тажрибавш гепатитда руй берадиган панцитопениянинг баъзи патогене™ механизмлари //Патология.-l 998 -№3.-Б.27-30..

11. К.Р. Тухтаев, М.Абдурахманов, Ф.Х.Азизова, Н.К. Тухтаев. Сурункаш гелиотрин гепатитда иммуномодулиннинг кон ва иммун систем аъзоларининг морфопогиясига таъсири// Узбекистон тиббиет журнали. 1998, №5. Б. 76-78.

Эксперимента сурункали гелиотрюии гепатитда Кон системаси хужайратарда 'затиладиган функционал-структур Узгаришлар ва уларии тузатишшшг баъзи йуллари.

Нодир Крдирович Тухтнев

Иганинг асосий максади эксперимснгал сурункали гелиотринли гепатит жараенида рифернк Кои ва Кизил суяк кУмигида кузатиладиган функционал-структур гаршпларнинг мохиятини аниклаш ва уларни тузатишнинг базъзи йулларини ишлаб Кишдир.Тажрибалар вазни 130-150 г болтан 112 ок; каламушда олиб борилди. ф угасали гепатит гелиотринни Хафтада бир маротиба 5 мг/100г микдорда б хлфта >байнида юбориб Хосил килинди. Таккослоп гурухи каламушларига эса гелиотрин нига стерил физиологик эритма юборилдй. Уд1бу гурухдар тажрибанииг 40,60 ва 90 -нларида текширилди. Сурункали гепатит хосил килинпш хайвонларнинг 3 гурухи крибанинг 60-кунидан бошпаб 10 кун мобайнида кунига 1 маротиба 0.1 мл/кг спленин, уц 1,4 мкг/кг тактивин.ехуд 2 мкг/кг иммуномодулнн билан даволандн. 5у гурухлар /н таккослов гурухи булиб сурункали гепатит чакирилгзн, лекин даволанмаган тамушлар Хнзмат Килди. Барча курсагилган муддатларда к,он ва кизил суяк кумиги. 1атологик , биофизик , питокимевий, радноавтографик ва электрон микроскогтик отар ёрдамида урганилди. ,

Гажрибалар сурункали гелиотринли гепатитнинг кон системасида чукур Узгаришларга тб кглишини ва улар конда анемияч тромбоцитопения ва лейкопения сифатида намоен тишини кУрсатди. Эритропоэз Хужайралари дифференциалланишнинг бузилиши, улар прукцнясшшнг ва ноэффектив эритропоэз даражасининг кучайиб кетиши анемияиинг огенезвда мухим рол уйнаши аникланди. Гранулоиито- ва тромбоцптопсэз эаеютрининг бузилиши лейкопения ва тромбоцитопенияга олиб келувчи мухим тялардан бири эканлиги аникланди. Суяк кУмигида плазматик хужайралар сонинипг па гонуютеар фагоцит хужайралар пролифератив фаоллигининг ошиб кетиши оргашпмда луа бузилишлар содир булаетгаьидан далолат берди.

"инаб кУрилган моддалар кон системаси хужайралари курсаткичларига турлича таъсир сатиши аникланди. Спленин бу курсатичларга сезирларлн таъсир этмади. Тактипип па' г/номодулиннииг ях,к,ол ифодаланган ижобий таъсири Кайд этилди. Тичусдан олиг.ган паратларни сурункали жигар касаллшелприда конда рун берадиган асоратларни элашда ;<$ллаш клиник гепатология ва гематология учуй пстикболли зк;млиги шдланди.

SUMMARY

Functional and structural changes of the blood system cells in the experimental chron heliotrine hepatitis and some ways of their correction

l ulditaes N. K.

The aim of this work was to study functional and structural changes of the blooc system cells in the chronic heliotrine hepatitis and to devise some ways of their correc tion. Experiments were carried out on 112 rats with weights body 13u-150 g. Chranii hepatitis in rats was induced by repeatea injection of heliotrine ( 5 mg/100g) during ( week«;. The rats of control group were injected by sterile physiological solution. All o the b.-oups studied on 40, 60 , 90, days of the experiments. Other groups of rats sinci 60 days of chronic hepatitis were treated by splenin (0,1 ml/kg), taktivin (1/ mkgr/kg), or immunomodulin (2 mkg/kg) during 10 days. Untreated rats with chronii hepatitis were used as the second control group. Blood and bone marrow cells were in vestigated by haematological, biophysical, cytochemical, radioautographical, transrais sional and scanning electrone microscopical methods.

It was noted , that the chronic hepatitis lead to anemia, tlirombocytopenia, ieucopenia in the peripheral blood. The alteration of differentiation of the erythropoetic cells, in creased destruction of them and enlarging degree of ineffective erythropoesis are play Lg important role in the pathogenesis of anemia. Increased number of plasma cells high proliferative activity of the mononuclear phagocytic cells in the bone marrow an indicated to immune disorders of the organism-

Used agents showed different influence on the functional and structural indexe of tne blood system cells. The effect of splenin was ineffable. Taktivin ani immunomodulin showed expressive positive effects. It was concluded , that th application of the thymic peptides in the treatment of hematological complications live diseases perspective for clinical hepatology and haematology.

Сдано в печать 26.05. 99 г: Подписано в печать 26.05. 99 г: Формат 60x84 1/16 Обьем 1,0 Тираж 100 экз. Заказ № 730 Цена договорная.

Типография 0.0.0. «Саодат РИА» г. Ташкент, проспект Ш. Рашидова,